ATCC細胞的培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法，也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。
對于ATCC細胞的培養(yǎng)常出現(xiàn)的技術(shù)問題我們?nèi)绾握页龃鸢福?/div>
1.培養(yǎng)用液pH對細胞生長有何影響？
由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
2.何為傳代培養(yǎng)？
在進行傳代時，如果是懸浮細胞，只需簡單稀釋即可，若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細胞每毫升接種數(shù)量為5´104-8´105個，傳代密度太低，細胞容易死亡，表現(xiàn)出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液會由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細胞已經(jīng)達到最大密度需要換液或進行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細胞，等長滿培養(yǎng)瓶表面，即可進行傳代，多數(shù)細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來，以促進傳代培養(yǎng)。
3.細胞培養(yǎng)的環(huán)境有何要求？
①無污染環(huán)境
培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當(dāng)細胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。
②恒定的溫度
維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。
③氣體環(huán)境
氣體是人體細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。
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